Rotavirusna okužba

Rotavirusna okužba ali črevesna / želodčna gripa je nalezljiva bolezen s simptomatskim zdravljenjem. Okužba z rotavirusi je najpogostejša pri otrocih.

Rotavirusna okužba predstavlja posebno nevarnost za otroke, saj se večina okužb pojavlja pri tej populaciji.

Povzročitelj rotavirusne okužbe

Okužbo povzročajo rotavirusi - virusi družine Reoviridae, ki so med seboj podobni v antigeni sestavi.

Vir okužbe

Vir okužbe je bolna oseba. Najbolj nevarno v smislu prenosa okužbe je bolnik v prvih 3 - 5 dneh kliničnih manifestacij okužbe z rotavirusi, saj je v tem obdobju največja vsebnost virusa v izločenih blatu.

Prenosni mehanizem

Glavni mehanizem prenosa virusa je fekalno-oralni, manj pogosto - pot do stika med gospodinjstvom in prenosa rotavirusov z okuženimi predmeti. Posebej nevarni so mlečni izdelki. Nizke temperature običajno ne uničijo virusa, zato shranjevanje hrane v hladilniku ne preprečuje razvoja okužbe z rotavirusi.

Obdobje epidemične rotavirusne okužbe

Pojav bolezni se pojavi v jesensko-zimskem obdobju, v drugih letnih časih pa lahko pride tudi do pojava bolezni. Praviloma se širjenje in pojavljanje značilnih simptomov okužbe z rotavirusom spremlja nastanek epidemije gripe, zato so ljudje okuženi z rotavirusom, bolj znanim kot "črevesna gripa".

Patogeneza

Po vstopu v človeško telo virus vstopi v celice sluznice tankega črevesa, kar povzroči uničenje črevesja. Sinteza specifičnih encimov, kot tudi kršitev sekrecijske funkcije črevesne sluznice, vodi do hude driske in dehidracije telesa zaradi velike količine elektrolitov in vode, ki vstopajo v črevesni lumen.

Simptomi okužbe z rotavirusom:

• zamašen nos;
• vneto grlo;
• kašelj;
• bolečine v trebuhu;
• slabost, bruhanje, driska;
• glavobol, vročina.

Klinika:

Glavna obdobja okužbe z rotavirusom:

• inkubacijska doba traja 1-2 dni;
• akutno obdobje traja 3-7 dni;
• traja 4-5 dni.

Za bolezen je značilen akuten začetek, vendar je možna prisotnost prodromalnega obdobja (približno 2 dni). Lahko povzroči bolečine, splošno slabost, glavobol, povečano utrujenost, izgubo apetita, neprijetne občutke in ropotanje v želodcu. Poleg tega je možen razvoj manifestacij bolezni na zgornjem delu dihalnih poti: zamašen nos, vneto grlo, lahek kašelj.

Splošna klinična slika vključuje sindrome zastrupitve, gastroenteritis in lezije zgornjih dihalnih poti.

Manifestacije gastroenteritisnega sindroma vključujejo: glasno tresenje v trebuhu, bolečine, predvsem na vrhu trebuha, slabost, bruhanje, driska. Driska z okužbo z rotavirusi ima vodeno peno in je rumene ali zelenkasto rumene barve.

Pojav sindroma zastrupitve: utrujenost, šibkost, glavobol. V hudih primerih: omotica, omedlevica.

Za poraz zgornjih dihal je značilen izcedek iz nosu, zamašen nos, vneto grlo, kašelj. Zev, ko ima svetlo rdečo barvo.

Zapleti in smrtnost

Za hude oblike bolezni, ki jih spremlja huda dehidracija, so značilni razvoj srčno-žilne insuficience, celo smrt (v 2-3% primerov). Po okužbi nastane nestabilna imunost, ki sčasoma oslabi, zato je možna ponovna okužba.

Diagnoza okužbe z rotavirusom

Diagnoza okužbe z rotavirusom je možna le, če se pri ljudeh z laboratorijskimi diagnostičnimi metodami, kot je PCR - polimerazna verižna reakcija, RPHA - pasivna hemaglutinacijska reakcija, CSC - vezava komplementa, imunofluorescenca in mnogi drugi.

Popolna krvna slika bo pokazala levkocitozo z nevtrofilno levo spremembo, povečano ESR - v akutnem obdobju. Za okrevalno obdobje je značilna normalizacija krvne slike. Analiza urina bo pokazala beljakovinske, levkocitne in rdeče krvne celice, hialinske valje v majhnih količinah.

Rotavirusna okužba - zdravljenje črevesne gripe pri odraslih in otrocih

Zdravljenje je simptomatsko, saj ni specifičnih antirotavirusnih zdravil za boj proti rotavirusu.

Načela zdravljenja okužbe z rotavirusom:

1. Izolacija bolnika z okužbo z rotavirusom
2. Boj proti dehidraciji. Zaželeno je, da se za to uporabijo posebne raztopine soli, na primer rehidron, sol. Uporabljajo se pri zdravljenju bolnika v bolnišnici, toda slanica za ponovno vzpostavitev normalnega kislinsko-bazičnega stanja telesa se lahko pripravi doma: 1 čajna žlička na 1 liter vode. Priporočljivo je piti veliko mineralne vode.
3. Boj proti temperaturi se mora začeti pri temperaturi 38, 5 in več. Ob istem času, odvisno od vrste vročine, je treba uporabiti fizikalne metode za zmanjšanje temperature, na primer, drgnjenje telesa z vodo, in kemikalije - jemanje posebnih zdravil, pri otrocih je bolje uporabiti sveče.
4. Sprejem encimskih pripravkov, adsorpcijskih in adstrigentnih sredstev (aktivni ogljik, polisorb), mlečnih bakterijskih pripravkov.
5. Prepovedano je jemati zdravila proti bolečinam za bolečino v trebuhu.

Indikacije za napotitev v bolnišnico zaradi okužbe z rotavirusom:

• postopno poslabšanje, dolgotrajna driska;
• pojav novih simptomov.

Prehrana za okužbo z rotavirusom:

Prehrana vključuje izogibanje mleku in mlečnim proizvodom, vključno z mlečnimi izdelki. Priporočljivo je, da v prehrano vključite piščančjo juho ali rižo kašo, kuhano v vodi brez dodajanja olja. Treba je jesti v majhnih porcijah z odmori. Priporočljivo je omejiti uživanje hrane, bogato z ogljikovimi hidrati.

Preprečevanje okužbe z rotavirusom

Ključni preventivni ukrepi za okužbo z rotavirusi so:

• Preprečevanje vstopa virusa v telo, vključno z izolacijo obolelih, rednim pranjem rok, uživanjem dokazanih in visoko kakovostnih izdelkov, z uporabo destilirane vode, pranja zelenjave in sadja;
• sanitarni nadzor gostinskih obratov in izdelkov v trgovinah, trgih.

Pred uporabo informacij, ki jih zagotavlja spletna stran medportal.org, preberite pogoje uporabniškega sporazuma.

Uporabniški sporazum

Stran medportal.org nudi storitve pod pogoji, opisanimi v tem dokumentu. Z začetkom uporabe spletne strani potrjujete, da ste pred uporabo spletnega mesta prebrali pogoje te uporabniške pogodbe in v celoti sprejmete vse pogoje te pogodbe. Ne uporabljajte spletnega mesta, če se ne strinjate s temi pogoji.

Opis storitve

Vse informacije, objavljene na spletnem mestu, so samo za referenco, informacije iz javnih virov so referenčne in niso oglaševanje. Spletna stran medportal.org ponuja storitve, ki uporabniku omogočajo iskanje drog v podatkih, pridobljenih iz lekarn, kot del dogovora med lekarnami in medportal.org. Za lažjo uporabo podatkov o zdravilih na mestu uporabe so prehranska dopolnila sistematizirana in podana na en sam način.

Stran medportal.org ponuja storitve, ki uporabniku omogočajo iskanje klinik in drugih zdravstvenih informacij.

Opozorilo

Informacije v rezultatih iskanja niso javna ponudba. Upravljanje spletne strani medportal.org ne zagotavlja točnosti, popolnosti in (ali) ustreznosti prikazanih podatkov. Uprava spletnega mesta medportal.org ni odgovorna za škodo ali škodo, ki ste jo utrpeli zaradi dostopa ali nezmožnosti dostopa do spletnega mesta ali zaradi uporabe ali nezmožnosti uporabe te strani.

S sprejemanjem pogojev te pogodbe popolnoma razumete in se strinjate, da:

Informacije na spletni strani so samo za referenco.

Uprava spletnega mesta medportal.org ne zagotavlja odsotnosti napak in neskladij glede prijavljenih na spletnem mestu in dejanske razpoložljivosti blaga in cen blaga v lekarni.

Uporabnik se obvezuje, da bo informacije, ki so v interesu, pojasnil s telefonskim klicem v lekarni ali uporabil informacije, ki jih bo po lastni presoji uporabil.

Uprava spletnega mesta medportal.org ne zagotavlja odsotnosti napak in neskladij glede urnika dela klinik, njihovih kontaktnih podatkov - telefonskih številk in naslovov.

Niti uprava spletnega mesta medportal.org niti katera koli druga stranka, ki sodeluje v postopku zagotavljanja informacij, ni odgovorna za kakršno koli škodo ali škodo, ki ste jo morda utrpeli, če ste se v celoti zanašali na informacije na tej spletni strani.

Uprava spletnega mesta medportal.org se zavezuje in se zavezuje, da si bo še naprej prizadevala za zmanjšanje razlik in napak v posredovanih informacijah.

Upravljanje strani medportal.org ne zagotavlja odsotnosti tehničnih napak, tudi glede delovanja programske opreme. Uprava spletnega mesta medportal.org se zavezuje, da bo čim prej naredila vse za odpravo napak in napak v primeru njihovega nastanka.

Uporabnik je opozorjen, da uprava spletnega mesta medportal.org ni odgovorna za obisk in uporabo zunanjih virov, povezave do katerih so lahko na spletnem mestu, ne daje odobritve za njihovo vsebino in ni odgovorna za njihovo razpoložljivost.

Uprava spletnega mesta medportal.org si pridržuje pravico, da spletno stran začasno prekine, delno ali v celoti spremeni njeno vsebino, spremeni Uporabniško pogodbo. Takšne spremembe se izvedejo le po presoji uprave brez predhodnega obvestila uporabniku.

Potrjujete, da ste prebrali pogoje te uporabniške pogodbe in v celoti sprejmete vse pogoje te pogodbe.

Oglaševalske informacije, na katerih ima umestitev na spletnem mestu ustrezno pogodbo z oglaševalcem, so označene kot "oglaševanje".

Rotavirusna okužba

Okužba z rotavirusi (rotavirusni gastroenteritis) je akutna nalezljiva bolezen, ki jo povzročajo rotavirusi, za katere so značilni simptomi splošne zastrupitve in poškodbe prebavnega trakta z razvojem gastroenteritisa.

Koda ICD-10
A08.0. Rotavirusni enteritis.

Etiologija (vzroki) okužbe z rotavirusi

Povzročitelj je član družine Reoviridae, rod Rotavirus (rotavirus). Ime temelji na morfološki podobnosti rotavirusov s kolesom (od latinskega "rota" - "kolo"). Pod elektronskim mikroskopom so virusni delci videti kot kolesa s širokim pestom, kratkimi naperami in jasno definiranim tankim robom. Virion rotavirusa s premerom 65–75 nm je sestavljen iz elektrona-gostega centra (jedra) in dveh peptidnih lupin: zunanje in notranje kapsule. Jedro 38–40 nm vsebuje notranje beljakovine in genetski material, ki ga predstavlja dvojna veriga RNA. Genom rotavirusov pri ljudeh in živalih sestavlja 11 fragmentov, kar je verjetno razlog za antigensko raznolikost rotavirusov. Replikacija rotavirusov v človeškem telesu poteka izključno v epitelnih celicah tankega črevesa.

Rotavirusna okužba, pogled v elektronskem mikroskopu

V rotavirusu so našli štiri glavne antigene; glavni je antigen skupine, beljakovina notranjega kapsida. Ob upoštevanju vseh skupinsko specifičnih antigenov so rotavirusi razdeljeni v sedem skupin: A, B, C, D, E, F, G. Večina človeških in živalskih rotavirusov spada v skupino A, znotraj katere se razlikujejo podskupine (I in II) in serotipi. Podskupina II vključuje do 70–80% sevov, izoliranih iz bolnikov. Obstajajo dokazi o možni korelaciji nekaterih serotipov z resnostjo driske.

Rotavirusi so odporni na okoljske dejavnike: v pitni vodi, odprtih vodnih telesih in odpadnih vodah, ostajajo do nekaj mesecev, za zelenjavo - 25–30 dni, za bombaž, volno - do 15–45 dni. Rotavirusi se ne uničijo s ponavljajočim se zamrzovanjem, pod dezinfekcijskimi raztopinami, etrom, kloroformom, ultrazvokom, ampak umrejo, ko so kuhani, obdelani z raztopinami s pH večjim od 10 ali manj. nizka (Avtor: Nalezljive bolezni: nacionalno vodstvo, uredil ND Yuschuk, Yu. Vengerov. 2009

Diagnoza okužbe z rotavirusom

Potrdi
Namestnik vodje
Glavni epidemiološki
Ministrstvo za zdravje ZSSR
G.G.NONISHCHENKO

7. marec 1989 N 15-6 / 6

Rotavirusna okužba

(METODIČNA PRIPOROČILA)

Inštitut za otroško paralizo in virusni encefalitis, Akademija medicinskih znanosti ZSSR.

Raziskovalni inštitut za epidemiologijo Ministrstva za zdravje ZSSR;

Raziskovalni inštitut za epidemiologijo in mikrobiologijo. G.N. Gabrievskogo Ministrstvo za zdravje RSFSR;

Znanstveno proizvodno združenje "Rostepidkompleks";

All-Union Znanstveno-raziskovalni inštitut za dezinfekcijo in sterilizacijo Ministrstva za zdravje ZSSR.

Smernice so namenjene zdravnikom in raziskovalcem zdravstvenih organov in institucij.

Človeški rotavirus spada v skupino med seboj podobnimi živalskimi virusi, ki poleg nje vključuje tudi virus nebraske diareje (NCDV), virus epizootske driske mladih miši (EDJM), virus opic (SA-II), ki izvira iz črevesne vsebine ovc in govedo (0), pa tudi patogeni prašičji drisko, žrebeta, mladički in druge živali. Vsi ti virusi imajo enako velikost in obliko in sta v antigenskih pogojih blizu drug drugemu.

Rotavirusne živali se dobro razmnožujejo v tkivni kulturi, zato so bile izolirane in preučene pred humanim rotavirusom. Rotavirusi telet in opic so zaradi svoje antigenske bližine človeškemu rotavirusu uporabljeni za ugotavljanje njegove etiološke vloge pri akutnem gastroenteritisu in so se do sedaj uporabljali v serološki diagnostiki in pri pridobivanju imunoreagentov.

Človeški rotavirus smo odkrili z elektronsko mikroskopijo v duodenalnih epitelnih celicah in v ekstraktih iztrebkov tipičnih bolnikov, kjer je pogosto vsebovan v zelo pomembnih koncentracijah (do 10 delcev v 1,0 g blata). Virus rotavirusa je dvo-kapsiden (tj. Prevlečen z dvoplastno proteinsko ovojnico) sferičnega delca s premerom 70 - 75 nm, ki vsebuje ribonukleinsko kislino - RNA (11 dvolančnih segmentov), ​​ima plavajočo gostoto 1,36 g / cu. cm s koeficientom sedimentacije 500 - 530 S

Glede na razpoložljive značilnosti je bil človeški rotavirus, skupaj z zgoraj navedenimi živalskimi virusi, uvrščen med rodavce rotavirusov družine Reoviridae. Ime "rotavirus" izhaja iz latinskega rota - kolesa, ki ga delček virusa spominja na elektronske mikroskopske pripravke.

Glede na antigensko specifičnost, ugotovljeno z ELISA testom, so rotavirusi razdeljeni v dve podskupini (označeni z rimskimi številkami - I in II) in po specifičnosti, zaznani v reakciji nevtralizacije, s 4 (in morda več) serotipi (označeni z arabskimi številkami - 1). 2, 3, 4). Specifičnost nekaterih podskupin določenih rotavirusov je določena z glavnim proteinom notranje kapside, njihova serotipska specifičnost pa določa glikoprotein zunanje kapside. Nedavno so odkrili rotaviruse novega tipa (ti pararotavirusi), ki nimajo skupine specifičnega antigena.

Okužba z rotavirusi je zelo razširjena. Informacije o njeni identifikaciji so bile objavljene v Avstraliji, Veliki Britaniji, DDR, Kanadi, Indiji, Španiji, ZDA, Franciji, na Japonskem in v mnogih drugih državah. V Sovjetski zvezi so bile v številnih regijah RSFSR, Zakavkazja, Ukrajine, baltskih držav, Srednje Azije in drugih ozemelj registrirane bolezni rotavirusnega gastroenteritisa pri otrocih in odraslih. Pri otrocih in odraslih se okužba z rotavirusi lahko kaže v obliki sporadičnih primerov, lokalnih skupinskih bolezni in množičnih izbruhov z obsegom različnih skupin prebivalstva na velikih območjih. Med hospitaliziranimi bolniki z akutnimi črevesnimi okužbami je delež odraslih z rotavirusnim gastroenteritisom v povprečju 10–15%, otroci pa 15–27% ali več. Podatki iz literature o izolaciji rotavirusa (antigena) pri zdravih otrocih in odraslih so zelo protislovni: od 0–0,5 do 42% pri otrocih in od 0% do 7% ali več pri odraslih. Rotavirusna okužba se zabeleži skozi vse leto. Vendar pa je v hladni sezoni odkritih več kot 70% bolnikov. V zimsko-pomladnem obdobju beležimo tudi večino izbruhov okužbe z virusom rotavirusov med prebivalstvom, pa tudi skupinske bolezni pri novorojenčkih in nedonošenčkih, otroke organiziranih skupin, starejše. Pri porazdelitvi rotavirusnih okužb (tako otrok kot odraslih) glede na spol ni bilo opaznih razlik.

Vir okužbe pri akutnih črevesnih okužbah rotavirusne etiologije so okuženi odrasli in otroci - bolniki z očitno obliko okužbe ali asimptomatskim izločanjem rotavirusov z blatom. Hkrati so otroci prvega leta življenja pogosto okuženi z materami, ki so okužene z rotavirusi, starejši otroci in odrasli pa iz otrok organiziranih otroških skupin. Okužba ljudi pri živalih ni dokazana, čeprav možnost ni izključena. Trenutno se rotavirusi različnih serotipov pojavljajo v izločkih skoraj 50 vrst živali in ptic z izrazitimi znaki driske in brez njih.

Rotavirusi pri bolnikih in osebah brez kliničnih znakov bolezni trenutno najdemo le v blatu. Bolniki izločajo rotavirus v okolje od prvega dne bolezni, pri vseh bolnikih pa je bila največja količina patogena v blatu (do 10-10 virusnih delcev na 1 g) odkrita v prvih petih dneh bolezni, kar določa največje epidemiološko tveganje bolnikov do drugih. v tem obdobju bolezni. V naslednjih 6 do 10 dneh se sproščanje rotavirusov z blatom pri bolnikih močno zmanjša, ko se blato normalizira. Povprečno trajanje izločanja rotavirusov pri bolnikih je 7–8 dni, pri nekaterih bolnikih pa lahko traja do 20–30 dni. Osebe brez kliničnih manifestacij bolezni lahko dolgoročno sproščajo rotavirusi s blatom - do nekaj mesecev ali več (obdobje opazovanja).

Glavni mehanizem prenosa rotavirusov je fekalno-oralno, ki se izvaja z vodnimi, prehrambenimi in domačimi prenosnimi potmi. Pri občasnih in lokalnih skupinskih boleznih se okužba z rotavirusi pojavlja predvsem v gospodinjstvu. To prispeva k zelo nizki patogeni dozi rotavirusov (v 10 virusnih delcih). Ugotovljeno je bilo, da rotavirusi na različnih okoljskih območjih ohranijo svojo sposobnost preživetja od 10-15 dni (odvisno od temperature in vlažnosti) do enega meseca; v blatu nekaj tednov do sedem mesecev.

Trenutno so v naši državi in ​​v tujini zabeleženi izbruhi rotavirusne okužbe z vodo in hrano. Rotavirusi najdemo v vodi rek, jezer, morij, podtalnice, vode iz pipe, nekaterih živilskih proizvodov (mleko itd.).

Možna je izvedba v nekaterih primerih kapljanja, prahu in drugih poti rotavirusa.

Rotavirusi so znani tudi kot eden od glavnih etioloških dejavnikov pri bolnišničnih (bolnišničnih) izbruhih akutnega gastroenteritisa. V bolnišnicah različnih profilov se lahko okuži do 50-60% bolnih otrok. Obstajajo primeri izbruhov v porodniških domovih. Pogosto prizadene otroke, ki se hranijo umetno, imajo akutne in kronične bolezni, z različnimi vrstami imunske pomanjkljivosti.

Odpornost na občutljivost. Ljudje vseh starostnih skupin so dovzetni za rotavirus. Največjo dovzetnost so opazili pri otrocih, starih 6 mesecev. do 2 leti. Protitelesa proti rotavirusom odkrijemo pri 50–60% otrok v prvem letu življenja, v starosti nad 3 let - več kot pri 90% in pri skoraj vseh odraslih. Vendar pa je v skladu z literaturo prisotnost protiteles v serumu v osnovi pokazala le srečanje človeškega telesa z rotavirusom in ne prisotnost imunosti, saj so tudi pri pomembni ravni humoralnih protiteles možne ponavljajoče se bolezni. Imunost z okužbo z rotavirusi ni povsem razumljiva. Verjamemo, da je odpornost proti okužbam predvsem posledica lokalne imunosti epitelijskih celic črevesja, ki je povezana s prisotnostjo sekretornih protiteles razreda IgA. Ta protitelesa najdemo tudi v mleku doječe matere in očitno služijo kot dejavnik pri pasivni imunizaciji novorojenčkov, ki lahko v odsotnosti kliničnih manifestacij bolezni z blatom sproščajo pomembne količine rotavirusov v okolje in okužijo prezgodaj rojene otroke in otroke s škodljivim premorbidnim ozadjem. Rotavirusi različnih serotipov ne ustvarjajo navzkrižne imunosti, zato lahko isti otrok ali odrasla oseba ponavljajo bolezni zaradi drugih serotipov virusa. Ugotovljena je tudi nestabilna imunost pri bolnikih z rotavirusnim gastroenteritisom, ponavljajoče se bolezni pa se pogosto zabeležijo 1–1,5 leta po okužbi.

Značilnosti epidemijskega procesa z okužbo z rotavirusi:

- splošna razširjenost ozemlja;

- huda zimska ali zimsko-pomladanska sezonost;

- nizka infekcijska doza patogena in visoka žarišča v organiziranih skupinah;

- poškodbe oseb vseh starostnih skupin;

- visok delež primerov med otroki, mlajšimi od 2 let, z največjim možnim odkrivanjem bolezni pri otrocih druge polovice življenja;

- visoka aktivnost vode in domače poti prenosa;

- lokacijo žarišč doma, večinoma omejena na družino;

- možnost asimptomatske izolacije rotavirusov pri otrocih in odraslih;

- možnost bolnišnične okužbe s sodelovanjem zdravstvenega osebja in staršev bolnih otrok.

Klinična slika okužbe z rotavirusi ima veliko skupnega s kliničnimi manifestacijami akutnih črevesnih bolezni drugačne etiologije, zaradi česar je težko diagnosticirati to bolezen. Vendar pa obstajajo številne značilne razlike, ki omogočajo pravočasno sumljivost te bolezni in pravilno izvajanje protiepidemičnih in terapevtskih ukrepov.

Inkubacijska doba je kratka in traja od 15 ur do 3 - 5 dni, najpogosteje pa 1 do 3 dni.

Večina bolnikov ima akutni začetek bolezni, ko se celotni kompleks simptomov razvije v prvih dneh bolezni. Pri majhnih otrocih je možen subakutni začetek, za katerega je značilno, da se v prvih dneh bolezni pojavijo 1 ali 2 simptoma in da se preostanek doda od 2 do 3 dni bolezni. Najbolj patognomonična za okužbo z rotavirusi je poškodba prebavnega trakta, ki je pri 60–70% bolnikov kombinirana z razvojem simptomov poškodb dihal. Včasih lahko kataralni simptomi nastopijo pred 3-4 dnevi črevesne disfunkcije. Za respiratorni sindrom je značilna zmerna hiperemija in zrnatost žrela, mehko nebo in okrogli loki, zamašen nos, kašelj, ki je za razliko od ARVI manj izrazit, nima nagnjenosti k povečevanju in je kratkotrajen (4 do 5 dni). Driska se pojavi pri 95–97% bolnikov. Za okužbo z rotavirusi je značilen razvoj gastroenteritisa, manj enteritisa. Stol je običajno tekoč, voden, peneč, slabo obarvan, brez nečistoč ali z majhno količino sluzi. Pri majhnih otrocih prevladuje vodena driska, kar pojasnjuje pogostejši razvoj eksikoze v tej starostni skupini. Pogostost blata v povprečju ne presega 4 do 5-krat na dan, lahko pa doseže 15 do 20-krat pri mlajših otrocih. Trajanje driske pri odraslih in starejših otrocih je 3-7 dni, pri dojenčkih pa pogosto traja do 10-14 dni. Bruhanje je kardinalni simptom in ga opazimo pri 80% bolnikov z okužbo z rotavirusom. Najpogosteje se pojavlja hkrati z drisko ali pred njo. Bruhanje je pogosto ponovljeno, vendar kratkoročno (1 do 2 dni). Ponavljajoče in nekontrolirano bruhanje zaradi te okužbe ni značilno in pogosto kaže na mešano okužbo. Temperatura, praviloma, ne presega 38,5 - 39 ° C in se normalizira za 3-4 dni bolezni. Najbolj značilni znaki splošne zastrupitve so šibkost, letargija, šibkost, glavobol, omotica. Resnost bolezni je določena z razvojem izotonične ekscikoze, I - II. Stopnje, manj pogosto III. Stopnje, ki je pogostejša pri dojenčkih. Hkrati so izgube elektrolitov (Na in K) majhne, ​​kar je treba upoštevati pri izvajanju rehidracijske terapije.

4. Diagnoza in diferencialna diagnoza

Objektivni pregled pri bolnikih je pokazal zaspanost, hiperremijo veznice in vaskularno injekcijo beločnice. Jezik zmerno obložen, suh. Na trebuhu je mehka, zmerno boleča na palpaciji v območju tankega črevesa. Jetra in vranica niso povečane. Slepo in sigmoidno debelo črevo mehko, neboleče. Krvni tlak se zmanjša. Puls ni preobremenjen, temveč je težnja k relativni bradikardiji. Ni meningealnih pojavov. V periferni krvi, na samem začetku bolezni, se lahko pojavi zmerna levkocitoza, od 2 do 3 dni bolezni je težnja po levkopeniji z zmanjšanjem števila levkocitnih stabov in povečanje števila limfocitov in monocitov, ESR ni pospešen.

V laboratorijski analizi urina je prišlo do rahle albuminurije, hitro prehodne mikrohematurije, rahlega povečanja števila levkocitov in možnega pojava hialinskih valjev. Spremembe v urinu so v skladu z resnostjo bolezni in dehidracijo.

Mikroskopski pregled blata število levkocitov ne presega 10 - 15 v vidnem polju, je prisotna sluz.

Rektoromanoskopsko je mogoče razkriti zmerno hiperemijo sluznice rektuma in sigmoidnega kolona brez fokalnih sprememb.

Rotavirusni gastroenteritis se deli z resnostjo, ki je odvisna od intenzivnosti driske in dehidracije, ki jo povzroča, pa tudi od resnosti splošne zastrupitve. Obstajajo tri stopnje resnosti rotavirusnega gastroenteritisa: blage, zmerno težke in redkeje hude.

Diferencialna diagnoza se izvaja s salmonelozo, kolero, dizenterijo, toksikoinfekcijami, povzročenimi s hrano, ki jih povzročajo pogojno patogeni mikroorganizmi, persinioza in drugi virusni gastroenteritis.

Za gastrointestinalno obliko salmoneloze je značilna sočasna bolezen ljudi, ki so jedli izdelke slabe kakovosti. Običajno akutni pojav: hipertermija, huda mrzlica, bruhanje, huda bolečina v trebuhu, obilna fetidna blata, ki ohranja svoj fekalni značaj, nevtrofilna levkocitoza s premikom levkocitne formule na levo. Pri salmonelozi ni sprememb v sluznici žrela, jetra so običajno povečana. Izolacija patogena pri bakteriološki preiskavi blata, bruhanja ali izpiranja želodca rešuje diagnozo.

Glede na številne klinične znake mase in hitrosti bolezni lahko rotavirusni gastroenteritis spominja na kolero. Vendar pa se okužba z rotavirusi odlikuje po blažjem poteku, predvsem pa zaradi dejstva, da ne razvije stanja algida, kot tudi prisotnost značilnih sprememb v sluznici orofaringeksa.

Najpomembnejši so rezultati bakterioloških raziskav v primeru odkrivanja Vibrio cholerae. Podobna situacija se pojavi pri okužbi z NAG.

Za bakterijsko dizenterijo je značilna akutna bolečina v trebuhu, pogosta, včasih napačna, nagnjenost, blato, mešano s sluzjo in krvjo, značilno sigmoiditis, konstantna febrilna reakcija, patološke spremembe v distalnem delu debelega črevesa po rektoskopiji. Vsi ti znaki, kot tudi rezultati bakterioloških raziskav, omogočajo relativno enostavno izvedbo diferencialne diagnostike za obliko kolitisa dizenterije. Z gastroenterično obliko dizenterije se vrednost bakteriološkega pregleda bistveno poveča.

Diferencialna diagnostika rotavirusnega gastroenteritisa in toksikoinfekcij, povzročenih s hrano, ki jih povzročajo oportunistični patogeni, je še posebej težka glede na nezadostno poznavanje klinične slike teh bolezni. Glede na diagnostični pomen laboratorijskih študij je treba dati prednost pozitivnim rezultatom viroloških in imunoloških študij, ki potrjujejo rotavirusno naravo bolezni, namesto odkrivanja pogojno patogenih bakterij v blatu bolnika.

Za gastrointestinalno obliko perinioze je značilen bolj postopen pojav, prisotnost, poleg gastroenteritisa, bolečin v mišicah in sklepih; jetra so običajno povečana; blato je viskozno zaradi pomembne primesi sluzi in včasih je možna kri. V krvi je opažena levkocitoza; ESR se je povečal.

Gastroenteritisni sindrom je lahko pri nekaterih virusnih boleznih izrazit. Sem spadajo adenovirusna okužba, ki je poleg črevesnih lezij značilna konjunktivitis, rinitis, faringitis, tonzilitis, bronhitis, pljučnica, povečanje vratnih bezgavk, jetra, vranica, podaljšana zvišana telesna temperatura.

Od enteritisa in gastroenteritisa, ki ga povzročajo enterovirusi Koksakija in ECHO, je za rotavirusni gastroenteritis značilna monosindromična klinična slika, pri kateri je vodilno mesto črevesna poškodba. V nasprotju s tem, med epidemijo izbruhov enterovirusne narave, je opaziti prisotnost različnih kliničnih oblik bolezni, "večplastnost" klinične slike, pri kateri lahko simptomi poškodbe membran v možganih, koži in zgornjih dihalnih poteh igrajo pomembno vlogo.

Diferencialna diagnoza okužbe rotavirusov s kolibacilozo pri otrocih je najtežja in lahko temelji na naslednjih merilih:

- večji akutni začetek okužbe z rotavirusom v primerjavi s kolibacilozo, zlasti zaradi enteropatogene kolibaciloze;

- hitrejše okrevanje od okužbe z rotavirusi, tudi pri majhnih otrocih;

- večja pogostost respiratornega sindroma pri okužbi z rotavirusom, vendar manjša resnost in trajanje.

Največja težava je diagnoza mešanih rotavirusno-bakterijskih okužb, katerih delež je v zimskih letnih časih precej velik (7 - 10% vseh OKI).

Značilnost klinike mešanih okužb je prisotnost kompleksnih simptomov, značilnih za obe kombinirani okužbi: povečanje simptomov zastrupitve, pojava znakov vnetnih sprememb v sluznici tankega in debelega črevesa ter počasnejše okrevanje.

Hospitalizacija otrok in odraslih s sumom OCI zaradi rotavirusov se izvaja v skladu s klinično (resnostjo bolezni) in epidemiološkimi indikacijami (prisotnost šibkih otrok v okolju bolnika, otroci prvega leta življenja, obiski predšolskih otrok, delavci v živilski industriji in osebe, ki so jim izenačene. nezmožnost izpolnjevanja protiepidemičnega režima doma itd.). Otroci, mlajši od enega leta s hudimi simptomi OCI, so najprej hospitalizirani. Obvezna je ločena hospitalizacija bolnikov s sumom rotavirusnega gastroenteritisa in akutnih črevesnih okužb drugačne etiologije (ločeni oddelki, škatle). Upoštevati je treba načelo "enkratnega polnjenja" komor (zabojev).

Zdravljenje bolnikov z rotavirusnim gastroenteritisom, ob upoštevanju obstoječih idej o patogenezi te bolezni, vključuje varčen režim in kompenzacijo za kršitve funkcionalnega stanja črevesja, obnovo ravnotežja hidroelektrolitov in razstrupljanje telesa.

V času akutnega obdobja bolezni je predpisana prehrana 4-B, v kateri je močno omejevanje ogljikovih hidratov (do 200 g) in povečanje količine beljakovin (do 150 g) z rahlim zmanjšanjem vsebnosti kalorij (2400 kal.). Količina sladkorja je omejena na 40 g na dan, zelenjavo in sadje. Mleko je izključeno. Sol ni omejena.

Prikazan je namen takšnih domačih prebavnih multienzimskih pripravkov, kot so oraz, solizim, somilaza, ki pri zdravljenju bolnikov z rotavirusnim gastroenteritisom ni slabši od uvoza (panzinorm, digestal, festal, trienzim itd.).

Nujno je treba oceniti stopnjo dehidracije organizma in izvajati terapijo z namenom obnavljanja presežnih izgub vode in soli. Ko je dehidracija po I - II stopnji po V.I. Raztopine glukoze in elektrolitov se dajo Pokrovskemu peroralno (rehidronski glukozolan), pri čemer se upošteva izguba tekočin in elektrolitov, ob dehidraciji III. Stopnje pa je treba začeti zdravljenje z intravenskim dajanjem vodno-solnih raztopin (trisol, kvartosol, klosol, acesol) itd.

Taktika uvedbe rešitev se izvaja v skladu z načeli rehidracijske terapije.

Za stabilizacijo normalnega krvnega obtoka in razstrupljanja lahko vnesete koloidne raztopine (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Poudariti je treba, da predpisovanje antibakterijskih zdravil, če ni sočasne bakterijske okužbe, ni upravičeno.

Priporočljivo je, da uporabite adsorbent in adstrigentna zdravila.

Zdravljenje virusne okužbe se trenutno ne razvija.

Ekstrakt okrevalistov se izvede po stabilni (v 2 do 3 dneh) normalizaciji blata in izginotju vseh drugih kliničnih simptomov osnovne bolezni v odsotnosti zapletov.

Otrokom, ki obiskujejo predšolske ustanove, delavce v prehrambeni ustanovi in ​​osebam, ki jim pripadajo, se po izginotju kliničnih simptomov enkrat opravi virološki pregled.

Preostali kontingenti bolnikov niso predmet obveznega laboratorijskega pregleda.

6. Laboratorijska diagnoza

Laboratorijska diagnoza rotavirusnega gastroenteritisa trenutno ni težavna. Hiter razvoj kliničnega sindroma in kratkotrajno bivanje v bolnišnici narekujejo potrebo po uporabi hitrih metod za določanje etiologije bolezni. Večina laboratorijskih diagnostičnih metod, ki so priporočene v tem priročniku, vam omogoča, da odkrijete rotaviruse prvi dan. Izbira metode je v vsakem primeru določena s tehnično opremo laboratorija in razpoložljivostjo ustreznih reagentov.

Tradicionalne metode odkrivanja seroloških sprememb v serumu bolnikov (reakcije nevtralizacije, inhibicije hemaglutinacije in fiksacije komplementa) so pomembne pri retrospektivni analizi bolezni. Zato je za zgodnjo serološko diagnozo okužbe z rotavirusom priporočljivo določiti protitelesa razreda IgM.

Predmet virološke študije bolne osebe je običajno blato. Prisotnost in porazdelitev rotavirusov v okolju se ugotavlja s pregledovanjem vzorcev tal, hrane in vode (odpadne vode, vode iz naravnih in umetnih rezervoarjev, pitne vode).

6.1. Odkrivanje rotavirusov v kliničnem materialu

in v vzorcih okolja

6.1.1. Priprava vzorcev za testiranje; vzorčenje

Pri jemanju vzorcev za virološke raziskave so izpolnjene nekatere splošne zahteve, pri čemer je treba sprejeti ukrepe za zaščito materiala pred kontaminacijo. Vzorce jemljemo samo v sterilnih posodah z gostim gumijastim zamaškom, ojačanim lepilnim ometom. Prenesite vzorce v posodah z ledom ali hladilnim sredstvom.

6.1.2. Priprava suspenzije, pojasnitev, t

čiščenje vzorcev, odstranjevanje bakterijske flore

Priprava vzorcev blata za študijo o rotavirusu vključuje pripravo 10% suspenzije, homogenizacijo, centrifugiranje pri 3000 vrt / min. V 30 minutah odstranite bakterijsko floro. Pri pregledovanju predmetov okolja in živilskih proizvodov se opravi predhodna koncentracija proučevanega materiala.

6.1.3. Koncentracija virusnih delcev v vzorcih vode

Koncentracija rotavirusov je pomemben pogoj za povečanje učinkovitosti njihovega odkrivanja v vodnih telesih okolja.

Metoda koncentriranja rotavirusov z uporabo adsorpcijske kromatografije na poroznem silicijevem dioksidu - makroporoznem steklu (MPS) - je enostavna in priročna, pri čemer uporabimo volumne vode od 0,1 do 10 litrov. Ko vzorec preide skozi plast MPS, se virus sorbira na stekleni površini. Za izločanje virusa z uporabo raztopin, ki so sposobne povzročiti desorpcijo virusa. Virus se odstrani iz stekla z majhno količino raztopine, kar vodi do koncentracije deset do sto krat v primerjavi z originalnim vzorcem.

Za izboljšanje adsorpcijskih lastnosti se domači preparati iz stekla znamke MPS-1000 VGH obravnavajo kot sledi: pripravi se zmes (1: 1) 3% H O in 6 M HCl. Steklo se napolni z pripravljeno mešanico s hitrostjo 1 volumska stekla za 2 volumski del mešanice. V vreli za dimljenje (brez zamaška) kuhamo 1 uro, pri tem pa upoštevamo varnostne ukrepe. Pranje do destilirane vode do nevtralnega pH. Sušimo pri 100 ° C.

Steklena kolona, ​​predhodno obdelana s silikonsko tekočino, napolnjena s steklom (2 - 3 cm3), Namočena v destilirani vodi. V preskusni vzorec (3 l) dodamo 1 M raztopino MgCl do končne koncentracije 0,05 M. Voda se skozi kolono prenese s hitrostjo 150–500 ml / uro, pri čemer se hitrost pretoka prilagodi s sponkami. Skozi kolono se prelije 10 ml elucijske raztopine: mesni ekstrakt 3%, pH 9,0; ali bujon triptoza fosfata 1%, pH 9,0; ali Tris HCl 0,1 M, ki vsebuje 2 M NaCl, pH 11,0 (raztopine so navedene po zmanjšanju njihovih elucijskih lastnosti). Sorbiramo frakcije z volumnom 1 ml, pH v frakcijah dovedemo do nevtralne vrednosti.

6.2. Odkrivanje virusnih delcev z elektronsko mikroskopijo (EM) in imunoelektronsko mikroskopijo (IEM)

Ker je vsebnost delcev rotavirusa v blatu tipičnih bolnikov običajno visoka v prvih 2-3 dneh bolezni, se metoda EM široko uporablja za odkrivanje rotavirusa, ki se lahko uporablja za odkrivanje delcev rotavirusa brez dodatne koncentracije fekalne suspenzije.

Za pripravo zdravil se kapljica preiskovane 10% suspenzije nanese na ploščo zobnega voska ali voščen papir. Na kapljico filma-substrata dolijemo predmetno elektronsko mikroskopsko mrežo. Po 1 - 3 minutah mrežo speremo s kapljico destilirane vode in kontrastno raztopino (2% raztopino fosforotungtinske kisline, nastavimo na pH 6,5 - 6,6 z 1 NKOH), katere presežek po 30 - 40 sekundah. odstranite filtrirni papir in mreža se posuši. Pregled preparatov se izvaja v elektronskem mikroskopu z instrumentalno povečavo 30 - 50000x.

Rotavirusi se zlahka odkrijejo z EM pregledom fekalnih suspenzij v značilnih velikostih in morfologiji virusnih delcev. Rotavirusi je treba razlikovati od različnih virusnih delcev in virusno podobnih tvorb, delcev bakteriofaga in bakterijskih flagel, ki jih najdemo v fekalnih materialih.

Uporaba IEM tehnologije v nekaterih primerih omogoča ne le povečanje odstotka odkrivanja rotavirusov, ampak tudi dokazovanje njihove etiološke vloge. Za študijo IEM se zmeša 0,1 ml 1: 5 razredčenega imunskega seruma živali z 0,4 ml 10% fekalnega ekstrakta. Zmes inkubiramo 1 uro pri sobni temperaturi in nato še 12 ur pri 4 ° C, nato pa jo centrifugiramo 90 minut. pri 15.000 vrt / min Supernatant se izsuši in nastala oborina se resuspendira v nekaj kapljicah destilirane vode, v nasprotju z 2% raztopino fosforne volframske kisline (pH 6,5) in se postavi na rešetke predmetov; odvečno vlago odstranimo s filtrirnim papirjem. Študija zdravil se izvaja v elektronskem mikroskopu z instrumentalno povečavo 50000x, pri čemer se opazujejo vsaj pet celic predmetne mreže. V primeru pozitivnega rezultata se delci rotavirusa odkrijejo v pripravkih v obliki specifičnih skupin (imunskih kompleksov).

6.3. Odkrivanje antigena rotavirusov v preskusnem materialu

6.3.1. Pridobivanje imunoreagentov

Hiperimunske serume in specifične rotavirusne imunoglobuline dobimo z imunizacijo zajcev, morskih prašičkov, piščancev.

Antigen za imunizacijo smo pripravili kot sledi: 5 ml suspenzije kulture rotavirusa SA-II obdelamo s tripsinom, dodamo 1,5-litrskim blazinicam z enojno plastjo heteroploidnih celic ledvic zelene opice 4647, inkubiramo 60 minut pri 37 ° C; dodamo vzdrževalni medij brez seruma in inkubiramo 24 do 48 ur pri 37 ° C. Vsa biomasa je podvržena 3-kratni zamrznitvi ali ultrazvočni obdelavi, dodamo PEG M 6000 do koncentracije 8 - 10%, pustimo 20 ur pri 4 ° C, nato centrifugiramo pri 10.000 obr / min. 2 uri Peleto ponovno suspendiramo v PBS (1/30 - 1/50 volumna biomase). Po čiščenju z freonom 113 vodno fazo uporabimo za imunizacijo živali in kot antigen v imunoloških študijah. Koncentrat v volumnu 1 ml vsebuje vsaj 10 virusnih delcev.

Imunizacija zajcev: zajce se injicira intravensko z 2 ml rotavirusnega pripravka 1., 7., 35., 42. dan in krvni odmerek jemljemo 49. dan po začetku imunizacije. Na 1. in 35. dan se antigen injicira z dodatnim Freundovim popolnim adjuvantom na več točkah hrbta.

Imunoglobulinsko frakcijo oborimo iz hiperimunskega kunčjega seruma z 10% vodno raztopino polietilen glikola (PEG) z molekulsko maso 6000. Oborino zberemo s centrifugiranjem, raztopimo in dializiramo proti 0,01 M K-fosfatnemu pufru (pH - 7,4) z 0,01 M Nace (pH - 7,4) FSB). Koncentracija imunoglobulinov je določena spektrofotometrično.

Imunizacija morskih prašičkov: živalim se intramuskularno injicira 0,5 ml koncentriranega rotavirusnega pripravka z enakim volumnom Freundovega popolnega adjuvanta 1.14 in 28. dan, vzorčenje krvi dva tedna po zadnji imunizaciji.

Imunizacija piščancev: 20-tedenski piščanci kokoši nesnic hibridov pasme bele Leggorn "Zarya-17" so imunizirani intravensko 1, 14, 28 dni. Med prvo imunizacijo antigen apliciramo dodatno intramuskularno v zmesi z enakim volumnom Freundovega popolnega adjuvansa. Največja količina protiteles v rumenjaku opazimo po tretji imunizaciji. Piščance lahko po ponovnem cepljenju uporabljate trajno.

Izolacija piščancev imunoglobulinov: rumenjak se loči od beljakovine v lupini ali Büchnerjevem lijaku in izpere z vodo iz pipe. Rumenjak (10 ml) prenesemo v epruveto za centrifugiranje, dodamo dvojni volumen (20 ml) FSB in dobro premešamo. PEG 6000 nanesemo na koncentracijo 3,5% (m / v) in mešamo 10 minut. pri 14000 g. Supernatant filtriramo skozi filtrirni papir v merilni valj. Dodamo še dodaten PEG 6000 do končne koncentracije 12% in premešamo. Oborjene imunoglobuline zberemo s centrifugiranjem (10 min. 14.000). Oborino raztopimo v 5 ml FSB (1/2 volumna rumenjaka). Koncentracija beljakovin v pripravku je običajno 6 - 12 mg / ml.

6.3.2. Metoda encimskega imunskega testa (ELISA)

Metoda encimskega imunskega testa (ELISA), ki temelji na uporabi protiteles, označenih z encimsko molekulo (peroksidazo), je ena najpogostejših in najbolj učinkovitih in specifičnih metod za odkrivanje virusnega antigena. Običajno uporabljamo neposredne in posredne "sendviče" - možnosti. Encimski marker, odkrit v barvni reakciji s substratom. Neposredna ELISA različica je hitrejša od posredne, vendar je manj občutljiva in specifična. V formulaciji posredne variante uporabimo anti-specifični komercialni konjugat imunoglobulinov z encimom; Da bi preprečili nespecifične interakcije med konjugatom in protitelesi, ki jih sorbiramo na panelu, je potrebno imeti protivirusne serume dveh različnih živalskih vrst.

Posredna ELISA različica: 0,1 ml anti-tromtaunskih imunoglobulinov iz rumenjaka jajčec imuniziranih piščancev na polovici (48) vdolbinic se vnaša v vdolbinice. V drugi polovici so imunoglobulini iz jajc, položenih pred imunizacijo, uvedeni kot negativna kontrola. Sorpcija imunoglobulinov poteka iz raztopine s koncentracijo 5 μg / ml v PBS preko noči pri 4 ° C. Vsebino vdolbinic izčrpamo, vdolbine speremo s PBS-T in 0,1 ml testnega vzorca nanesemo v PBS-T z 1% BSA in 0,01 M EDTA v vdolbinice z antirotavirusom in normalnimi imunoglobulini ter inkubiramo 1 uro pri 37 ° C.

Po izpiranju v vdolbine v PBS-T pufru dodamo 0,1 ml kunčjega anti-rotavirusnega seruma, razredčenega na 1: 1000-1: 25000. Optimalna razredčitev seruma je določena v vnaprej določenih poskusih. Plošče se zaprejo in inkubirajo 2 uri pri 37 ° C. Vdolbinice izperemo in dodamo 0,1 ml komercialnega pripravka protiteles, označenih s peroksidazo, proti kunčjim IgG pri koncentraciji 1 do 2,5 μg / ml vsebnosti peroksidaze v PBSB-T-BSA in inkubiramo 1 uro pri 37 ° C. Vdolbinice izperemo, dodamo 0,1 ml sveže pripravljene substratne zmesi (O-fenilen-diamin 0,5 mg / ml v 0,05 M Na-citratnem pufru pH 5,0; HO - 0,03%). bodite previdni!)) in inkubirajte pri sobni temperaturi v temi 30-40 minut. Encimatsko reakcijo ustavimo z dodatkom 0,05 ml 3 M H SO. Rezultati reakcije se vizualno ali spektrofotometrično upoštevajo. Vzorci se štejejo za pozitivne, katerih optična gostota ni manjša od 2-kratne optične gostote negativne kontrole.

6.3.3. Metoda koaglutinacije

Ta metoda temelji na sposobnosti proteina A Staphylococcus aureus Cowanovega seva, da se poveže z Fc-fragmentom IgG in med nastajanjem specifičnega kompleksa antigen-protitelo povzroči pojav aglutinacije.

Za formulacijo koaglutinacijske reakcije se uporablja komercialno suhi stafilokokni reagent, ki vsebuje protein A (Pasteurjev inštitut za elektrokemijsko medicino, Leningrad), ki se pred uporabo rehidrira v 0,1% raztopini metilen modrega.

Prej se vsaka serija hiperimunskega seruma testira na prisotnost antistafilokoknih protiteles. Če želite to narediti, na stekleno ploščo mešamo enake količine seruma pri razredčitvi 1: 500 in 10% suspenzije stafilokoka. Upoštevajte rezultate v 5 minutah aglutinata. Za delo izbranega seruma, ki ne vsebuje antistafilokoknih protiteles v razredčitvi 1: 500. Za pripravo diagnosticuma smo zmešali 0,01 ml anti-ratavirusnega seruma, razredčenega 1:10 s FSB, z 0,5 ml 10-odstotne suspenzije stafilokoka, hranili pri sobni temperaturi 1 uro, nato pa dodali 9,5 ml FSB (diagnosticum). Na enak način se senzificirajo stafilokoki s preimunskim serumom (kontrolni reagent). Diagnostični in kontrolni reagent uporabljamo v reakciji PKA in TRKA.

Za pripravo RCA v u-oblikovane vdolbine plošče naredimo 0,05 ml PBS pH-7,4; v dveh vdolbinicah dajemo takacchi mikrotiter ali razpršilnik 0,05 ml 10% suspenzije blata in pripravimo serijska dvakratna razredčenja 1: 2 - 1: 256. V vdolbinice v prvi vrsti dodamo 0,05 ml diagnosticuma in v vdolbinice druge vrstice 0,05 ml kontrolnega reagenta. Plošče so pokrite s pokrovom in inkubirane v termostatu pri 37 ° C - 3 ure. V vsakem poskusu smo vzorec suspenzije iztrebkov pozitivni in negativni za rotavirus, kot tudi lizate celic, okuženih z rotavirusom SA-II, ki smo jih prej testirali z elektronsko mikroskopijo.

Upoštevanje reakcije: rezultati se štejejo za pozitivne, če se skupaj z diagnosticumom odkrije aglutinacijski »dežnik« z negativnim rezultatom ali 4-kratnim zmanjšanjem titra vzporedno s kontrolnim reagentom. Rezultati se štejejo za negativne, če se diski oblikujejo v obeh vzporednih vrstah. Da bi odpravili nespecifično koaglutinacijo v parih vrst, se blato iztrebke adsorbira z enakim volumnom normalnega kunčjega seruma pri 37 ° C 2 uri, čemur sledi segrevanje pri 80 ° C 45 minut. Nato ponovno doživite reakcijo koaglutinacije.

6.3.4. Metoda trdne faze reakcije koaglutinacije (TRKA)

Ta metoda odkrivanja antigenov rotavirusov temelji na principu imunske metode s trdno fazo (glej 4.3.2). Vendar pa za razliko od slednjega TRCA ne uporablja encima kot oznake, temveč diagnostični in kontrolni reagent (glej 4.3.3).

Za postavitev TRKA uporabite imunološke plošče z u-oblikovanimi vodnjaki. Za preobčutljivost v vdolbinice dodamo 0,1 ml hiperimunskega seruma, razredčenega z 0,01 M karbonatno-bikarbonatnim pufrom (pH 9,6) 1: 1000. Serumske plošče pustimo 2 do 3 ure pri 37 ° C. Nevezana na trdno fazo protitelesa odstranimo s spiranjem trikrat 3 minute. FSBT. Nato naredite 0,05 ml preučevanega, kot tudi očitno pozitivnega in negativnega vzorca (2 vdolbinici za vsak vzorec) v vdolbinicah in pustite 2 uri pri 37 ° C, da se tvorijo kompleksi antigen-protiteles. Nevezani antigen in sorodne nečistoče odstranimo s trojno pranje PBS. Nato v eno vdolbino dodamo 0,05 ml 0,5-odstotnega stafilokoknega diagnostike, v drugi (kontrolni) 0,05 ml 0,5-odstotne suspenzije stafilokoka, občutljivega na preimunski serum (glej 4.4.3). Inkubacijo izvedemo bodisi 1 do 2 uri pri 37 ° C, nato 1 do 3 ure pri 4 ° C ali 18 do 24 ur pri 4 ° C. Rezultat aglutinacijske reakcije se upošteva vizualno: s pozitivno reakcijo aglutinirane bakterije tvorijo dežnik; z negativno reakcijo - bakterije se popolnoma usedejo v obliki diska.

6.3.5. Metoda posredne hemaglutinacije

Pri tej metodi odkrivanje antigena rotavirusov temelji na diagnosticumu eritrocitnih protiteles, ki je eritrocit ovc, senzibiliziran z imunoglobulinsko ascitesno tekočino belih podgan, imuniziranih z rotavirusom SA-II.

Dvojne razredčitve 10% fekalne suspenzije v vdolbinicah na plošči so testirane z diagnosticumom eritrocitov. Aglutinacija diagnosticum eritrocitov kaže na prisotnost antigena rotavirusov v vzorcu. Podroben opis postopka za formulacijo PHA je naveden v navodilih, priloženih kompletu za pripravo (Znanstveno-proizvodno združenje "Rostepidkompleks", Rostov-na-Donu).

Komplet Rotatest temelji na povratni pasivni hemaglutinaciji in je namenjen za odkrivanje rotavirusa v blatu in za odkrivanje protiteles proti rotavirusu v krvnih serumih.

6.3.6. Metoda imunocitokemične detekcije rotavirusa

Metoda temelji na imunokemični določitvi virusnega antigena, sintetiziranega v celicah, zaradi njihove okužbe z materialom, ki vsebuje virus.

Prednost metode v primerjavi z ELISA je večja občutljivost, kot tudi sposobnost določanja in kvantificiranja infektivnosti preskusnega vzorca.

Postopki eksperimenta: presajene celice ledvice zelene opice v koncentraciji 3 do 10 celic / ml naredijo 0,2 ml v vdolbinicah plošč z ravnim dnom in inkubirajo pri 37 ° C (24 do 48 ur). Celice nato speremo z Eagle-MEM medijem. Testni material razredčimo v mediju Eagle-MEM, aktiviramo 1 uro pri 37 ° C v prisotnosti 10 μg / ml tripsina in dodamo v 0,1 ml v vsaj 4 vdolbine. Pozitivne kontrole so vdolbine, v katere je bil vstavljen material, za katerega je znano, da vsebuje rotavirus. Negativne kontrole: vdolbinice z neokuženimi celicami in vdolbinicami, v katere se uvaja material, podoben testu, vendar ne vsebuje rotavirusov. Adsorpcijo izvedemo 1 uro pri 37 ° C, nato odstranimo medij, celice speremo z medijem Eagle-MEM. V vdolbinice dodamo 0,2 ml medija Eagle-MEM z 1 μg / ml tripsina in inkubiramo 48 ur pri 37 ° C.

Celice speremo dvakrat s slanico in fiksiramo s hladnim (-20 °) 85% acetonom, inkubiramo 2 uri pri -20 °, nato odstranimo aceton. Ploščo speremo 3-krat s PBS, ki vsebuje 0,05% Tween 20 (PBS-T). V vdolbinice dodamo 0,1 ml razredčenega 1: 1000 v serumu proti rotavirusu PBS-T imunske stekline. Inkubiramo 2 uri pri 37 ° C. Po pranju plošče dodamo 0,1 ml peroksidazno označenega anti-IgG kunčjega protitelesa (komercialni pripravek) v vdolbinice v jašku pri koncentraciji 2 μg / ml z vsebnostjo peroksidaze v PBS z 1% BSA in inkubiramo 1,5 ure pri 37 ° C C.

Ploščo speremo 2-krat s PBS-T in 1-krat z 0,05 M acetatnim pufrom, pH 5,0. V vdolbinice dodamo 0,1 ml sveže pripravljene raztopine substrata peroksidaze, ki vsebuje 10 ml acetatnega pufra / 4 mg 3-amino-9-etilkarbazola (AEC), raztopljenega v 0,5 ml acetona, in 0,01 ml 33% vodikovega peroksida. (Pozor! Delo z AEC zahteva previdnost). Inkubiramo 30-40 minut. v temi pri sobni temperaturi. Reakcijo ustavimo s spiranjem plošče z destilirano vodo.

Obračunavanje reakcije poteka pod svetlobnim mikroskopom z majhno povečavo. Negativne kontrolne vdolbinice ne smejo vsebovati obarvanih celic. Lokalne skupine obarvanih celic so žarišča virusne okužbe.

6.3.7. Metoda imunofluorescence

Za identifikacijo antigena rotavirusa z imunofluorescenco uporabimo celično linijo 4647. Celice gojimo na krovnih stekelcih ali preparatih, zaprtih v vialah ali epruvetah penicilina. Okuženo kulturo inkubiramo 24 do 48 ur pri 37 ° C, nakar očala odstranimo iz vial, izperemo v 0,15 M raztopini soli z dodatkom fosfatnega pufra pri pH 7,2, speremo z destilirano vodo in posušimo na zraku. Nato pripravke fiksiramo v dveh izmenah (vsak po 10 minut) kemično čistega acetona, ohlajenega na 4 ° C.

Pripravki so obdelani z indirektno metodo v vlažni komori. Eno kapljico imunskega rotavirusnega kunčjega seruma nanesemo na celice kulture in inkubiramo 30 minut. pri 37 ° C, nato zdravila trikrat speremo v FSB in odstranimo odvečno vlago. Mokre pripravke obarvamo z zmesjo enakih volumnov anti-FITC-konjugata in govejega albumina, označenega z rodaminom, in inkubiramo 30 minut. pri 37 ° C. Po 3-kratnem pranju v FSB se pripravki posušijo na zraku. Da bi odpravili nespecifično fluorescenco, je antivirusni serum pred uporabo adsorbiran s homogenatom normalne celične kulture, konjugat FITC pa obdelan z aktivnim ogljem po standardnih metodah.

Kot obvezne kontrole se uporabljajo naslednje kontrole: pripravki iz neokuženih kultur, obdelani na podoben način, in pripravki okuženih kultur, obdelani v prvi fazi normalnega in heterolognega antivirusnega seruma iste vrste kot imunski serum do rotavirusa.

V primeru pozitivnih rezultatov opazimo izrazito svetlo zeleno fluorescenco v citoplazmi celic.

6.4. Metoda elektroforetizacije rotavirusov

Metoda temelji na identifikaciji rotavirusov z uporabo elektroforeze v poliakrilamidnem gelu virusnih genomskih RNA segmentov. Metoda omogoča diferenciacijo sevov rotavirusov na podlagi razlik v elektroforetski mobilnosti posameznih segmentov RNA različnih izolatov in se zato pogosto uporablja v epidemioloških študijah. Metoda ne zahteva predhodne obdelave izolatov, ima visoko občutljivost in absolutno specifičnost.

Metoda je posebej zanimiva za epidemiologe pri preiskovanju skupinskih bolezni izbruhov rotavirusne okužbe.

Izvaja se lahko na podlagi laboratorijev, opremljenih z elektroforezno napravo.

Za analizo zadostuje 0,2 - 0,5 ml 10 - 20% fekalne suspenzije. Suspenzije obdelamo s freonom 113 in inkubiramo z pronazo (0,2 mg / ml, 15 minut) v prisotnosti natrijevega dodecil sulfata (1%) in natrijevega etilendiamintetraacetata (0,001 M). Po dodatku natrijevega acetata (0,3 M) se RNA deproteinizira z zmesjo fenola: kloroform-izoamil alkohola in obori z 2,5 volumni etanola (18 ur pri -20 ° C ali 2 uri pri -70 ° C). Oborino zberemo s centrifugiranjem, raztopimo v vodi in dodamo disocijacijski pufer. Elektroforezo izvedemo po metodi Laemmlija v ploščah z 10% gelom. Srebrov nitrat (0,011 M) se običajno uporablja za obarvanje RNA v gelu. Po postopku manifestacije v gelu so vidni 11 pasov RNA, ki ustrezajo genomskemu segmentu rotavirusa.

6.5. Določanje imunoglobulina razreda M v serumu

pri bolniku z okužbo z rotavirusom s trdno fazno metodo

reakcije koaglutinacije (TRCA)

V tem primeru se pri modifikaciji uporablja načelo koaglutinacijske reakcije v trdni fazi (glej 4.3.4): za senzibilizacijo ploščnih vdolbinic uporabite 0,1 ml komercialnega ovčjega monospecifičnega seruma proti človeškemu IgM v razredčitvi 1: 1000. Plošče inkubiramo 2-4 ure pri 37 ° C. Nato vdolbinice izperemo s FSBT, napolnimo s 3% raztopino želatine in pustimo 30 minut pri 37 ° C. Vdolbinice izperemo FSBT in naredimo 0,05 ml preučevanega, pa tudi namerno pozitivnega in negativnega seruma, razredčenega 1: 100 FSBT (2 luknji za vsak serum). Pri določanju titra protiteles se pregledajo dvojna razredčenja testiranih vzorcev (1:10 - 1: 1280). Plošče inkubiramo 2 uri pri 37 ° C in po pranju v parne vdolbine vnesemo 0,05 ml diagnostičnega in kontrolnega reagenta. Reakcija se upošteva po 1 do 2 urah (glej zgoraj 4.3.4).

Isto načelo, ki ga je spremenila TRCA, se uporablja za testiranje protiteles IgA in IgG za okužbo z rotavirusi, kot tudi pri analizi kolostruma in mleka za laktoglobuline.

Metoda določanja imunoglobulina razreda M v bolnikovem serumu se uporablja za zgodnjo diagnozo manifestnih oblik in njihovo diferencialno diagnozo z asimptomatskimi oblikami okužbe z rotavirusi.

7. Protiepidemične ukrepe

Vsak primer akutne črevesne okužbe, ki jo povzročajo rotavirusi, zlasti otroci prvega leta življenja, kot tudi otroci, ki obiskujejo predšolske ustanove, potrebuje skrbno epidemiološko analizo za določitev vira, glavnih načinov in dejavnikov prenosa zaradi pravočasnega izvajanja protiepidemičnih ukrepov. v izbruhu.

Ukrepi za identifikacijo in nevtralizacijo vira okužbe. Odkrivanje sumljivih bolnikov opravijo zdravniki vseh zdravstvenih ustanov: med ambulantnimi obiski, obiski na domu, zdravniški pregledi otrok v zavodih, bolnišnicah itd. Identificirani bolniki so izolirani iz otroških skupin. Zdravniško opazovanje in zdravljenje bolnikov se lahko opravita doma ali v bolnišnici. Otroci, ki obiskujejo otroške ustanove, ki so odpuščeni iz bolnišnice ali so zaključili domače zdravljenje z negativnimi laboratorijskimi testi, so sprejeti v skupine otrok na podlagi potrdila pediatra. Otroci, ki so imeli WG in še naprej izločajo rotaviruse (ali antivirus rotavirusov) z blatom brez kliničnih znakov okužbe, se lahko sprejmejo v vrtce in skupine vrtcev vrtcev-vrtcev, ki so predmet organizacije stalnega medicinskega opazovanja in ponavljajočih se laboratorijskih preiskav v 2 do 3 tednih. od začetka bolezni ali izolacije virusa.

Epidemiološki pregled družinskih žarišč bolnikov s FG poteka z boleznijo otrok, mlajših od 2 let, in odraslih od števila določenih kontingentov. Epidemiolog odide v otroško ustanovo z anketo, če se ponavljajo primeri ne-bakterijskega gastroenteritisa.

Zdravstveno opazovanje otrok, ki komunicirajo s pacienti, se izvede v petih dneh od dneva izolacije zadnje bolne osebe.

Laboratorijsko testiranje rotavirusov (antigenov) otrok in odraslih, ki so komunicirali z bolniki, tako v družini kot v organiziranih skupinah, se izvaja po navodilih infektologa in epidemiologa, če obstajajo indikacije (pojav v družini ali v otroški skupini ponavljajočih se bolezni OKI s podobno kliniko), grobo kršitev sanitarnega in higienskega režima, prisotnost v izbruhu delavcev živilskih podjetij in oseb, ki so jim izenačene, itd.). Obvezna laboratorijska preiskava je odvisna od matere bolnega otroka v prvem letu življenja. Osebe, pri katerih se v blatu pojavijo rotavirusi (antigeni), so podvrženi temeljitemu kliničnemu pregledu pri specialistu za nalezljive bolezni. V odsotnosti kliničnih znakov bolezni otroci in zaposleni iz ekipe niso izolirani.

Zaposleni v živilskih podjetjih, vodne storitve itd. v času laboratorijskih preiskav in zdravniškega nadzora. Ponavljajoče se laboratorijske preiskave oseb, ki izločajo rotaviruse (antigene) z blatom, se opravi po predpisih infektologa in epidemiologa s časovnim presledkom od 5 do 7 dni z uporabo izčrpnega laboratorijskega pregleda.

Če se v otroških ustanovah pojavijo skupinske bolezni, se karantenski ukrepi izvajajo v 5 dneh od trenutka izolacije zadnjega bolnika.

Institucije redno izvajajo sanitarno in izobraževalno delo, namenjeno preprečevanju okužbe z rotavirusi.

Ukrepi za odpravo mehanizma prenosa okužbe.

Študije so pokazale škodljiv učinek na rotaviruse pri +70 ° C po 15 minutah; če so izpostavljeni ultravijoličnemu sevanju, se rotavirusi po 15 minutah tudi inaktivirajo.

Glede na njihovo odpornost na delovanje široko uporabljenih razkužil so rotavirusi blizu enterovirusov in hepatitisa A. Zato je v centrih za okužbo z rotavirusi in v bolnišnicah, kjer so bolniki, priporočljivo izvesti dezinfekcijske ukrepe glede na režime in uporabo sredstev, ki so priporočljiva za virusni hepatitis A in okužbe z enterovirusi (Dodatek N 4 k Odredbi Ministrstva za zdravje ZSSR N 752 z dne 07/08/81 in Odredba Ministrstva za zdravje ZSSR N 916 z dne 08/04/83). Posebno pozornost je treba nameniti pravilnemu ravnanju z rokami oseb, ki služijo otrokom, ter bradavicam, igračam, posodam in drugim predmetom za oskrbo pacientov.

Priporoča se redno ultravijolično obsevanje. Ultravijolično sevanje se običajno izvaja z obsevalniki - OBN-150 na 30 kubičnih metrih. m sob, OBP-300 60 cu. m sob in drugih. Neoklopljeni napajalniki so nastavljeni po stopnji 1 - 1,5 W na 1 cu. m sob v odsotnosti ljudi (da bi se izognili poškodbam sluznice oči), zaščiteni - v višini 2 - 2,5 W na 1 cu. m, se obsevanje lahko izvede v prisotnosti ljudi. Čas razkuževanja - 30 - 40 minut. Po čiščenju prostora, spreminjanju posteljnega perila in drugih delih, povezanih z nastajanjem prašnega aerosola, je treba opraviti obsevanje zraka.

V specializiranih oddelkih bolnišničnega osebja morajo nositi dihalne maske.

Organizacija sanitarnih in higienskih ukrepov za preprečevanje okužbe z rotavirusi se izvaja v skladu z veljavnimi navodili in priporočili za druge okužbe s fekalno-ustnim mehanizmom širjenja patogena.

Eden od učinkovitih ukrepov za preprečevanje okužbe z rotavirusi pri novorojenčkih je dojenje.

Specifično preprečevanje okužbe z rotavirusi se ne izvaja.